一、原理 本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被抗體，樣本中的殘留物氯霉素和氯霉素酶標(biāo)記物抗原競爭微孔條上預(yù)包被的抗體，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。 ? 二、試劑盒技術(shù)指標(biāo) 試劑盒靈敏度：???????? 0.1ppb 樣本定量檢測下限?????? 蜂蜜? 0.1 ppb 牛奶? 0.05 ppb??? 雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚? 0.05 ppb?????????? 交叉反應(yīng)率 氯霉素?? ? 100 ％ 甲砜霉素?? < 0.1％ 氟甲砜霉素 < 0. 樣本回收率 雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚? 80％±20％ 蜂蜜???????????????????????? 75％±15％ 牛奶???????????????????????? 80％±20％ ? 三、?試劑盒組成 1．微量測試孔：??????? 96T/8孔 2．標(biāo)準(zhǔn)品液：（1mL/瓶）0 ppb? 0.05 ppb? 0.15 ppb?? 0.45 ppb?? 1.35 ppb? 4.05 ppb 3．酶標(biāo)記物????????? 7 mL 4．底物緩沖液破????? 7 mL 5．底物液??????????? 7 mL 6．終止液??????????? 7 mL 7．20倍濃縮洗滌液?? 50 mL? 加蒸餾水稀釋到1000 mL 8．20倍復(fù)溶液?????? 12 mL? 加蒸餾水稀釋到240 mL ? ? 四、樣本前處理步驟 1.??????**（雞肉，魚肉，蝦肉，豬肉）前處理方法 將樣品勻質(zhì)，稱取樣品3g，加入3 mL蒸餾水，震蕩均勻，再加入6 mL乙酸乙酯，震蕩10min。5000r/min離心10min，吸取上層2 mL，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復(fù)溶液復(fù)溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 2.牛奶，牛初乳 溶液1：0.36M亞鐵**鉀溶液。稱取152.06g亞鐵**鉀，定容至1L。 溶液2：1.04M**鋅溶液。稱取299.01g**鋅，定容至1L。 稱取樣品9.6mL，分別加入溶液1和溶液2各200μL，震蕩均勻，5000r/min離心10min。吸取上清3mL至另一離心管中，加入6mL乙酸乙酯，震蕩10min，5000r/min離心10min。吸取上層2mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1mL正己烷溶解干燥物，再加入1mL復(fù)溶液復(fù)溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 3.肝臟（豬肝） 稱取樣品3g，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min，吸取上層2mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復(fù)溶液復(fù)溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 4.雞蛋 稱取樣品3g，加入6 mL乙酸乙酯，震蕩10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min。吸取上層2 mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復(fù)溶液復(fù)溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 ? 注意： 復(fù)溶時一定要先加入正己烷溶解干燥物，再加入PBS復(fù)溶。震蕩過程不宜太劇烈，防止乳化。 ? 五、操作步驟 1． 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。 3． 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL /孔，然后加入酶標(biāo)高物50μL /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，37℃條件下反應(yīng)25 min（室溫反應(yīng)30min）。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5． 顯色：每孔加入底物緩沖液50μL，再加底物液50μL，輕輕振蕩混勻，37℃或室溫環(huán)境避光顯色10min。 6． 測定：每孔加入終止液50μL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（在20min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值。 ? 六、 結(jié)果判定 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/mL）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。 ? 七、 注意事項(xiàng) 1.終止液為2M**，避免接觸皮膚。 2.不要使用已過有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。 3. 0標(biāo)準(zhǔn)液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質(zhì)，請勿使用。 4.顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請勿使用。 ? 八、儲藏條件和保質(zhì)期 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。